Поиск по сайту
 
Продукты
 
Научная библиотека
 
Мой СибЭнзим
 
Подписка
 
Новости
 
Сервис
 
О компании
 
Контакты
 
Вакансии
 

Набор для предварительной очистки ДНК, связанной с клетками крови (К008/ К008-Ф)

Для работы потребуются:

- вакутейнеры для забора крови на 9 мл (EDTA K2 или EDTA K3);

- центрифуга ELMI CM-6MT (Латвия), ротор 6M или 6M.02;

- набор автоматических пипеток и наконечники к ним;

- пробирки с крышками пластиковые на 10 мл и мерные на 15 мл;

- штативы для пробирок;

- морозильная камера на -20°С,

- ёмкость для льда, лёд;

- этанол 96%;

- маркер для надписей на пробирках;

- *физ. раствор аптечный стерильный – 190 мл (*В набор К008-Ф включён).

  1. Забор крови


Взятие периферической крови проводится натощак из кубитальной вены. Для анализа необходимо 9 мл. При заборе крови используются иглы "Vacuette", 38 х 0,8 мм, 21Gх11/2 и пробирки "Vacuette" с ЭДТА (EDTA K2 или EDTA K3).


  1. Подготовка растворов:


  1. Приготовление раствора трипсина – раствор №1: содержимое одной ампулы (10 мг) трипсина (производства ООО «САМСОН-МЕД», г. Санкт-Петербург) растворить в 24 мл физ. раствора. (Полученного раствора хватает на 6 выделений ДНК. Допускается хранение раствора трипсина в замороженном виде при -20°С. Размораживать его для дальнейшего применения рекомендуется только 1 раз во избежание потери реакционных свойств).

  2. Заранее разморозить растворы №2 и №3, раствор №2 тщательно перемешать пипетированием.


  1. Выделение ДНК


  1. Вакутейнер с кровью осторожно перевернуть 7-8 раз и центрифугировать 10 мин при 1000 g на центрифуге типа ELMI CM-6MT (Латвия). Надосадочную жидкость (плазму крови) отобрать пипеткой и удалить.

  2. Оставшиеся в вакутейнере клетки отмыть физ. раствором. Для этого к осадку клеток добавить 5 мл физ. раствора, суспендировать осажденные клетки осторожным переворачиванием и перенести в 15 мл мерную пробирку. Ополоснуть стенки вакутейнера физ. раствором и перенести его в ту же 15 мл пробирку. Довести общий объем до 13 мл физ. раствором.

  3. Полученную суспензию центрифугировать 10 мин при 1000 g. Надосадочную жидкость (физ. раствор с остатками плазмы) отобрать пипеткой и удалить.

  4. К осадку клеток крови снова добавить физ. раствор до метки 13 мл и повторить процедуру отмывки 2 раза (всего 3 раза).

  5. К осадку клеток добавить 4 мл раствора №1 комнатной температуры, несколько раз аккуратно перевернуть до получения однородной суспензии и оставить на 15 мин при комнатной температуре (в течение этого времени суспензию еще 2 раза аккуратно перемешать переворачиванием).

  6. Центрифугировать 10 мин при 1000 g.

  7. Для того чтобы избавиться от возможно оставшихся клеток надосадочную жидкость перенести в пластиковую пробирку на 10 мл с крышкой и центрифугировать 10 мин при 1000 g.

  8. Аккуратно отобрать надосадочную жидкость (не захватывая клетки) и перенести в пластиковую пробирку на 15 мл с крышкой. Добавить 200 мкл раствора №2, перемешать переворачиванием, затем добавить 200 мкл раствора №3, еще раз перемешать переворачиванием.

  9. Добавить 2,5 объёма охлажденного в холодильнике 96%-ного этанола (10 мл). Закрыть пробирку крышкой, перемешать переворачиванием 5-6 раз и оставить при -20°С на 12 часов (на этом этапе, при необходимости, выделение ДНК может быть приостановлено на длительное время).

|  Домой  |  Продукты  |  Научная библиотека  |  Мой СибЭнзим  |  Подписка  |  Новости  |  Сервис  |  О компании  |  Контакты  |  Вакансии  |  ISO 9001  |