| Сайт узнавания | YA↑TR
RT↓AY |
| Источник | Flavobacterium aquatile B15 |
| Субстрат для определения активности | Олигонуклеотидный дуплекс
5`-CGAGTTCA^TAGCTGGGCCCAAC-3`
3`-GCTCAAGT^ATCGACCCGGGTTG-5` |
| Описание | Внимание! FaiI расщепляет канонический сайт и ряд других сайтов с меньшей активностью.
При длительной инкубации фермент может гидролизовать ДНК до коротких олигонуклеотидов. |
| Единица активности | За единицу активности принимается количество фермента необходимое для гидролиза 1 pmol олигонуклеотидного дуплекса указанной структуры за 1 час при 50°С в 20 μl реакционной смеси |
| Оптимальный SE-буфер | B (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT.) |
| Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: | | B | G | O | W | Y | Rose | | 100 | 50 - 75 | 10 - 25 | 25 - 50 | 25 - 50 | 100 |
|
| Оптимальная температура | 50oC |
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке |
| Лигирование | После гидролиза 3-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК pUC19 сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. |
| Чувствительность к метилированию | не проверялось |
| Инактивация 20 мин при | 80oC |
| Примечание | С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер B. |
| Литература: |  Томилова Ю.Э., Чернухин В.А., Дегтярев С.Х. Сайт-специфическая ДНК-эндонуклеаза FaiI узнает вырожденную четырёхнуклеотидную последовательность 5'-YA^TR-3' // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – 2011. – Т. 7 – № 2 – С. 11-16
|