Сайт узнавания | CCANNNN↑NTGG GGTN↓NNNNACC |
Источник | Acinetobacter calcoaceticus B7 |
Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда (dcm-) |
Единица активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда(dcm-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. |
Оптимальный SE-буфер | G (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM NaCl; 1 mM DTT.) |
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: | B | G | O | W | Y | Rose | 10 - 25 | 100 | 25 - 50 | 50 - 75 | 50 - 75 | 100 |
|
Оптимальная температура | 37oC |
Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 2 года. |
Лигирование | После гидролиза 5-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. |
Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. |
Чувствительность к метилированию | Блокируется при перекрывании dcm- метилированием (CmCWGG): CCANNNCCTGG или CCAGGNNNTGG. |
Инактивация 20 мин при | 65oC |
Примечание | С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер G |
Литература: | Дедков В.С., Репин В.E., Речкунова Н.И., Дегтярев С.Х., Верхозина В.A., Виноградова T.П., Изв. Сиб. Отд. Акад. Наук СССР 1: 35-37 (1990).
|