Информация по продукту: Bis I


Название
Bis I
Кат. номераE485E486
Фасовки, е.а.40200
Концентрация, е.а./мл1000-20001000-2000
Цена, руб613624544

Сайт узнавания
G(5mC)NGC
CGN(5mC)G
ИсточникBacillus subtilis T30
Субстратная специфичностьФермент расщепляет только С5-метилированную ДНК.
Не расщепляет немодифицированную ДНК.
Субстрат для определения активностиОлигонуклеотидный дуплекс
5` GCTTGTACTTTA G(5mC)G G C ATTGATTCTCACCACG 3`
3` CGAACATGAAAT C G C(5mC)G TAACTAAGAGTGGTGC 5`
Единица активностиЗа единицу активности принимается количество фермента необходимое для гидролиза 1 pmol олигонуклеотидного дуплекса указанной структуры за 1 час при 37°С в 20 ul реакционной смеси
Оптимальный SE-буферSE-буфер BisI (10 mМ Tris-HCl (pH 9,0 при 25°С); 10 mМ MgCl2; 150 mМ KCl;1 mМ DTT.)
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
BGOWYRose
10 - 2525 - 5050 - 750 - 1050 - 7530
Реакционный буферSE-буфер BisI, (10 mМ Tris-HCl (pH 9,0 при 25°С); 10 mМ MgCl2; 150 mМ KCl;1 mМ DTT.)
Оптимальная температура
37oC
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК плазмиды pFsp4HI1(линеаризованной ферментом BamHI) 1 единицей фермента в течение 16 часов при 37°С. Плазмида pFsp4HI1 содержит ген фермента ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI , который модифицирует сайт узнавания GCNGC с образованием 5`-G(5mC)NGC-3`/3`-CGN(5mC)G-5`.
Чувствительность к метилированиюФермент расщепляет только С5-метилированную ДНК.
Не расщепляет немодифицированную ДНК.
Инактивация 20 мин при
65oC
ПримечаниеС ферментом поставляется 10 Х SE-буфер BisI.
Литература:Патент на изобретение RU 2270859 С1 (2006) // Дегтярев С.Х., Чмуж Е.В., Абдурашитов М.А., Каширина Ю.Г., Дедков В.С., Томилова Ю.Э., Мезенцева Н.В., Гончар Д.А. Штамм бактерий Bacillus subtilis - продуцент эндонуклеазы рестрикции Bis I.
 Е.В. Чмуж, Ю.Г. Каширина, Ю.Э. Томилова, Н.В. Мезенцева, В.С. Дедков, Д.А. Гончар, М.А. Абдурашитов, С.Х. Дегтярев Новая эндонуклеаза рестрикции Bis I из Bacillus subtilis Т30 узнаёт метилированную последовательность ДНК 5’-G(5mC)↓NGC-3’ // Биотехнология, 2005, № 3, С. 22-26.