Информация по продукту: Щелочная фосфатаза


Название
Щелочная фосфатаза
Кат. номераE327E328
Фасовки, е.а.100500
Концентрация, е.а./мл1000010000
Цена, руб11504600

ИсточникВыделена из кишечника теленка
ОписаниеКатализирует дефосфорилирование 5`- и 3`-концов ДНК и РНК. Также гидролизует рибо- и дезоксирибонуклеозидтрифосфаты.
Единица активностиЗа одну единицу активности принимали количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкмоля p-нитро-фенилфосфата (PNPP) в 1 мл реакционной смеси за 1 мин при 37°С. При определении единиц активности использовали 1 М диэтаноламин-HCl (pH 9.8 при 25°C), 50 mМ p-нитро-фенилфосфат, 0,5 mМ MgCl2 и препарат фермента.
Реакционный буферSE-буфер O, (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура
37oC
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 8.2 при 25°C); 1 mM ZnCl2; 50 mM KCl, 1mM MgCl2; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке
ПримечаниеФункциональный тест: В результате обработки 1 мкг ДНК pUC19/HindIII в 20 мкл реакционной смеси, содержащей 1 x SE-буфер O и 0.5 мкл препарата фермента, в течение 30 мин при 37°C и последующей сшивки с помощью Т4 ДНК лигазы и трансформации клеток E.coli, получали >10-кратное уменьшение числа выросших колоний по сравнению с использованием необработанной ДНК pUC19/HindIII.

Протокол дефосфорилирования 5`-концов ДНК после гидролиза эндонуклеазой рестрикции (ЭР):
На 20 мкл реакционной смеси:
10 x SE буфер для ЭР или буфер “O” - 2 мкл,
ДНК - 0.5-1 мкг,
деионизованная вода - до 20 мкл.
Добавить 1 мкл эндонуклеазы рестрикции, перемешать пипетированием. Инкубировать в течение 0,5-1 часа при оптимальной температуре. Добавить 0,2-1 мкл (2-10 ед.) щелочной фосфатазы (E327/E328), перемешать пипетированием. Инкубировать в течение 0,5-1 часа при 37°C. Очистить ДНК гель-фильтрацией, на спин-колонках или путем экстракции фенолом-хлороформом с последующим высаживанием 96%-ным этанолом.