Сайт узнавания | GCNNNNN↑NNGC CGNN↓NNNNNCG |
Источник | Bacillus stearothermophilus MW |
Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда |
Единица активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. |
Оптимальный SE-буфер | Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.) |
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: | B | G | O | W | Y | Rose | 10 - 25 | 25 - 50 | 25 - 50 | 50 - 75 | 100 | 40 |
|
Оптимальная температура | 55oC |
Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Для периода более 7 дней рекомендуется хранить при -70°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке |
Лигирование | После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. |
Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 55°C. |
Чувствительность к метилированию | не проверялось |
Инактивация 20 мин при | 80oC |
Примечание | При 37°С активность - 20% от максимальной.
С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер Y. |
Литература: | Надеев A.Н., Дедков В.С., Томилова Ю.Э., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (2002).
|