| Сайт узнавания | ↑CCWGG
GGWCC↓ |
| Источник | Pseudomonas species 6 |
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда (dcm-) |
| Единица активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dcm-) за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. |
| Оптимальный SE-буфер | B (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT.) |
| Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: | | B | G | O | W | Y | R | | 100 | 50 - 75 | 10 - 25 | 25 - 50 | 75 - 100 | 10 |
|
| Оптимальная температура | 55oC |
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке |
| Лигирование | После гидролиза 3-кратным избытком фермента около 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. |
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 6 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. |
| Чувствительность к метилированию | Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (CmCWGG) : CCWGG. |
| Инактивация 20 мин при | 80oC |
| Примечание | При 37°С активность очень низкая.
С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер B. |
| Литература: | Дедков В.С., Томилова Ю.Э., Килева Е.В., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (2002)
 В.С. Дедков, Н.А. Михненкова, Л.П. Власенко, Ю.Э. Томилова, Ю.Г. Каширина, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярёв Эндонуклеаза рестрикции AjnI из Acinetobacter johnsonii R2 — изошизомер EcoRII, узнаёт 5’-↓CCWGG-3’, но не блокируется dcm-метилированием // Биотехнология, 2004, № 3, С.19-24
|
Построить диаграмму расщепления участка ДНК по Вашему выбору с помощью данной эндонуклеазы рестрикции.
Введите в окно справа последовательность, состоящую из литер A, G, T, C и N длиной не менее 50 и не более 50 тысяч символов и нажмите кнопку Отправить | |
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:
Для просмотра длин фрагментов наведите курсор на дорожку. Вы можете скопировать данные, если необходимо, из всплывающего окнаДлины фрагментов на дорожке |
M - маркер, 1 - ДНК аденовируса-2, 2 - ДНК фага Лямбда, 3 - ДНК фага T7, 4 - pUC19, 5 - pBR322
|
