| Сайт узнавания | ↑(N)8AAGNNNNNCTT(N)13↑
↓(N)13TTCNNNNNGAA(N)8↓ |
| Источник | Flavobacterium aquatile Ob10 |
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда |
| Единица активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. |
| Оптимальный SE-буфер | W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.) + SAM |
| Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: | | B | G | O | W | Y | R | | 0 - 10 | 25 - 50 | 75 - 100 | 100 | 50 - 75 | 70 |
|
| Оптимальная температура | 37oC |
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке |
| Лигирование | После гидролиза 3-кратным избытком фермента 20% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше |
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С |
| Чувствительность к метилированию | не проверялось |
| Инактивация 20 мин при | 65oC |
| Примечание | Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Для достижения 100% активности SAM следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 0.01 mM.
С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер W, SAM. |
| Литература: | Дедков В.С., Синичкина С.А., Абдурашитов M.A., Попиченко Д.В., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (2001).
 В. С. Дедков, С. А. Синичкина, М. А. Абдурашитов, Д. В. Попиченко, С. X. Дегтярёв Эндонуклеазы рестрикции FalI и FalII из Flavobacterium aquatile Ob10 узнают 5'-(8/13)AAG(N)5CTT(13/8)-3' и 5'-CG↓CG-3', соответственно // Биотехнология, 2003, № 6, c 24-29
|
