| Сайт узнавания | GAT↑C
C↓TAG |
| Источник | Bacillus stearothermophilus KT |
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда (dam-) |
| Единица активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dam-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. |
| Оптимальный SE-буфер | W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.) |
| Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: | | B | G | O | W | Y | R | | 25 - 50 | 50 - 75 | 75 - 100 | 100 | 50 - 75 | 100 |
|
| Оптимальная температура | 37oC |
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке |
| Лигирование | После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены |
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С |
| Чувствительность к метилированию | Блокируется dam-метилированием (GmATC):
5`-G(6mA)TC-3`/3`-CT(6mA)G-5`
Не блокируется CG метилированием.
Гидролизует полуметилированный по аденину сайт:
5`-G(6mA)TC-3`/3`-CTAG-5` |
| Инактивация 20 мин при | 65oC |
| Примечание | С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер W |
| Литература: |  А.Н. Надеев, В.А.Чернухин, О.О. Севастьянова, Ю.Э. Томилова, Н.М. Шинкаренко, А.А. Евдокимов, С.Х. Дегтярев BstKTI – новый dam-чувствительный неошизомер эндонуклеазы рестрикции MboI, способный гидролизовать полуметилированный субстрат // Биотехнология, 2006, №2, с. 5-10
|
Построить диаграмму расщепления участка ДНК по Вашему выбору с помощью данной эндонуклеазы рестрикции.
Введите в окно справа последовательность, состоящую из литер A, G, T, C и N длиной не менее 50 и не более 50 тысяч символов и нажмите кнопку Отправить | |
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:
Для просмотра длин фрагментов наведите курсор на дорожку. Вы можете скопировать данные, если необходимо, из всплывающего окнаДлины фрагментов на дорожке |
M - маркер, 1 - ДНК аденовируса-2, 2 - ДНК фага Лямбда, 3 - ДНК фага T7, 4 - pUC19, 5 - pBR322
|
