| Сайт узнавания | CACNNN↑GTG
GTG↓NNNCAC |
| Источник | Из штамма E.coli несущего клонированный ген DraIII из Deinococcus radiophilus |
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда |
| Единица активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. |
| Оптимальный SE-буфер | SE-буфер 2K (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 200 mM KCl; 1 mM DTT.) + BSA |
| Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: | | B | G | O | W | Y | Rose | | 25 - 50 | 50 - 75 | 75 - 100 | 75 - 100 | 50 - 75 | 100 |
|
| Оптимальная температура | 37oC |
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 300 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке |
| Лигирование | После гидролиза 10-кратным избытком фермента 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше |
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг
ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. |
| Чувствительность к метилированию | не проверялось |
| Инактивация 20 мин при | 65oC |
| Примечание | Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер 2K, BSA. |
| Литература: | de Wit, C.M., Dekker, B.M.M., Neele, A.C., de Waard, A., FEBS Lett. 180: 219-223 (1985)
Grosskopf, R., Wolf, W., Kessler, C., Nucleic Acid res. 13: 1517-1528 (1985)
|