| Сайт узнавания | CCC↑GGG
GGG↓CCC |
| Источник | Из штамма E.coli несущего клонированный ген Sma I из Serratia marcescens |
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда (HindIII-digest) |
| Единица активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 25°С в 50 мкл реакционной смеси. |
| Оптимальный SE-буфер | Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.) |
| Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: | | B | G | O | W | Y | Rose | | 0 - 10 | 0 - 10 | 0 - 10 | 0 - 10 | 100 | 50 |
|
| Оптимальная температура | 25oC |
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке |
| Лигирование | После гидролиза 20-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются высокоактивной T4 ДНК-лигазой в присутствии 10% ПЭГ и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше. |
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК
40 ед фермента в течение 16 часов при 25°С. |
| Чувствительность к метилированию | не проверялось |
| Инактивация 20 мин при | 65oC |
| Примечание | С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер Y.
Для фасовок Turbo (E177T и E178T) прикладывается буфер 10x SE-Буфер Y.
Turbo Sma I можно использовать как для быстрого гидролиза ДНК (в течение 15 мин), так и в стандартной реакции гидролиза в течение 1 ч.
Применение Turbo эндонуклеаз рестрикции:
- быстрый гидролиз (анализ) ДНК
- быстрое приготовление векторов для клонирования
- гидролиз ДНК двумя разными ферментами
Свойства Turbo фермента: С помощью 1 мкл эндонуклеазы рестрикции Turbo Sma I можно расщепить до 1 мкг двуцепочечной ДНКв 1x SE-Буфере Y в течение 15 мин (см. протокол ниже).
Препарат ДНК, используемый в реакции быстрого гидролиза Turbo ферментом, должен быть высокой степени очистки.
Данный Turbo фермент можно применять и в стандартной реакции гидролиза ДНК (в течение 1-16 ч).
Стандартный протокол Turbo реакции:
На 20 мкл реакционной смеси:
Y (x10) - 2 мкл
ДНК - 0,2-1 мкг
Дист. вода - до 20 мкл
+ 1мкл препарата Turbo Sma I эндонуклеазы рестрикции.
Инкубировать при 25°C в течение 15 мин.
|
| Литература: | Endow, S.A., Roberts, R.I., J. Mol. Biol. 112: 521-529 (1977).
|
Построить диаграмму расщепления участка ДНК по Вашему выбору с помощью данной эндонуклеазы рестрикции.
Введите в окно справа последовательность, состоящую из литер A, G, T, C и N длиной не менее 50 и не более 50 тысяч символов и нажмите кнопку Отправить | |
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:
Для просмотра длин фрагментов наведите курсор на дорожку. Вы можете скопировать данные, если необходимо, из всплывающего окнаДлины фрагментов на дорожке |
M - маркер, 1 - ДНК аденовируса-2, 2 - ДНК фага Лямбда, 3 - ДНК фага T7, 4 - pUC19, 5 - pBR322
|