Информация по продукту: Sfi I


Название
Sfi IБлокируется GGC(5mC)NNNNNGGCC метилированием  Не блокируется GGCCNNNNNGGC(5mC) метилированием  
Кат. номераE123E124E123XE124X
Фасовки, е.а.1000500010005000
Концентрация, е.а./мл10000100004000040000
Цена, руб2110844021108440

Сайт узнавания
GGCCNNNNNGGCC
CCGGNNNNNCCGG
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген Sfi I из Streptomyces fimbriatus
Субстрат для определения активностиДНК фага Т7
Единица активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси.
Оптимальный SE-буферG (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM NaCl; 1 mM DTT.) + BSA
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
BGOWYRose
75 - 10010025 - 5025 - 5025 - 5075
Оптимальная температура
50oC
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке
ЛигированиеПосле гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 50°С.
Чувствительность к метилированиюБлокируется при перекрывании dcm метилированием (CmCWGG): GGCCWGGNNNGGCC.Не блокируется при перекрывании dcm метилированием (CmCWGG): GGCCNNNNNNGGCCWGG.
Инактивация 20 мин при
65oC
ПримечаниеПри 37°C активность 75%-100% от максимальной.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер G, BSA.
Литература:Qiang, B.-Q., Schildkraut, I. Nucleic Acids Res. 12: 4507-4515 (1984).
 В. С. Дедков, С.Х. Дегтярев Определение эндонуклеаз рестрикции в колониях микроорганизмов Streptomyces и Nocardia // Прикладная биохимия и микробиология Том 28, 1992, №. 2, 309- 313