| Сайт узнавания | GGCCNNNN↑NGGCC
CCGGN↓NNNNCCGG |
| Источник | Из штамма E.coli несущего клонированный ген Sfi I из Streptomyces fimbriatus |
| Субстрат для определения активности | ДНК фага Т7 |
| Единица активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси. |
| Оптимальный SE-буфер | G (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM NaCl; 1 mM DTT.) + BSA |
| Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: | | B | G | O | W | Y | Rose | | 75 - 100 | 100 | 25 - 50 | 25 - 50 | 25 - 50 | 75 |
|
| Оптимальная температура | 50oC |
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке |
| Лигирование | После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше. |
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК
20 ед фермента в течение 16 часов при 50°С. |
| Чувствительность к метилированию | Блокируется при перекрывании dcm метилированием (CmCWGG): GGCCWGGNNNGGCC.Не блокируется при перекрывании dcm метилированием (CmCWGG): GGCCNNNNNNGGCCWGG. |
| Инактивация 20 мин при | 65oC |
| Примечание | При 37°C активность 75%-100% от максимальной.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер G, BSA. |
| Литература: | Qiang, B.-Q., Schildkraut, I. Nucleic Acids Res. 12: 4507-4515 (1984).
 В. С. Дедков, С.Х. Дегтярев Определение эндонуклеаз рестрикции в колониях микроорганизмов Streptomyces и Nocardia // Прикладная биохимия и микробиология Том 28, 1992, №. 2, 309- 313
|
