| Сайт узнавания | GGN↑NCC
CCN↓NGG |
| Источник | Pseudomonas species N4 |
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда |
| Единица активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. |
| Оптимальный SE-буфер | Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.) |
| Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: | | B | G | O | W | Y | R | | 10 - 25 | 10 - 25 | 10 - 25 | 25 - 50 | 100 | 50 |
|
| Оптимальная температура | 37oC |
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке |
| Лигирование | После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. |
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 30 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. |
| Чувствительность к метилированию | Блокируется метилированием
5`- GGNN(5mC)C - 3`/3`- C(5mC)NNGG - 5` и
5`- GGNN(5mC)С - 3`/3`- CCNNGG - 5` |
| Инактивация 20 мин при | 65oC |
| Примечание | С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер Y. |
| Литература: | Абдурашитов M.A., Килева E.В., Шевченко A.В., Дедков В.С., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (1995).
 В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК мыши in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, 3, №4, с. 19-27.
|
