Информация по продукту: Mte I


Название
Mte I
Кат. номераE553E554
Фасовки, е.а.5002500
Концентрация, е.а./мл1000010000
Цена, руб613624544

Сайт узнавания
G(5mC)G(5mC)NG(5mC)G(5mC)
(5mC)G(5mC)GN(5mC)G(5mC)G
ИсточникMicrobacterium testaceum 17B
Субстратная специфичностьФермент расщепляет только С5-метилированную ДНК.
Субстрат для определения активностиСубстрат pHspAI10/DriI+M.Fsp4HI представляет собой ДНК плазмиды pHspAI10, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI и метилированной ДНК-метилтрансферазой Fsp4HI. Плазмида pHspAI10 содержит ген ДНК-метилтрасферазы M.HspAI, которая модифицирует сайт узнавания
5`-GCGC-3` с образованием
5`-G(5mC)GC-3`/3`-CG(5mC)G-5`.
Кроме того, данная плазмида дополнительно метилирована ДНК-метилтрасферазой М.Fsp4HI, которая модифирует сайт
5`-GCNGC-3` с образованием
5`-G(5mC)NGC-3`/3`-CGN(5mC)G-5`.
В результате в используемом субстрате имеется один канонический сайт узнавания МteI:
5`-G(5mC)G(5mC)NG(5mC)G(5mC)-3`/3`-(5mC)G(5mC)GN(5mC)G(5mC)G-5`.
МteI может также расщеплять сайт узнавания, включающий шесть 5-метилцитозинов [1], однако активность фермента в этом случае меньше более чем на порядок.
Единица активностиЗа одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг ДНК плазмиды pHspAI10/DriI+M.Fsp4HI за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси
Оптимальный SE-буферW (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
BGOWYRose
25 - 5075 - 10075 - 10010050 - 75100
Реакционный буферSE-буфер W, (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура
55oC
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200мкг/мл BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке
Неспецифический гидролизНе наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Mte I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированиюФермент расщепляет только С5-метилированную ДНК.
Инактивация 20 мин
Нет
ПримечаниеС ферментом поставляется 10 Х SE-буфер W.
Литература:1.  В.А. Чернухин, Д.А. Гончар, Е.В. Килёва, В.А. Соколова, Л.Н. Голикова, В.С. Дедков, Н.А. Михненкова, С.Х. Дегтярёв Новая метилзависимая сайт-специфическая ДНК- эндонуклеаза MteI расщепляет последовательность 5’-G(5mC)G(5mC)NG(5mC)GC-3’/3’-CG(5mC)GN(5mC)G(5mC)G-5’ // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – 2012. – Т. 8 – № 1 – С. 16 - 26
2. Абдурашитов М.А., Куксова А.Н., Акишев А.Г., Землянская Е.В., Дегтярев С.Х.MteI-ПЦР анализ – новый метод определения статуса метилирования GC-богатых регуляторных участков генов-онкосупрессоров человека// Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, Т. 9 , № 3 ,с. 15-23 (2013)