Информация по продукту: Aox I


Название
Aox I
Кат. номераE569E570
Фасовки, е.а.50250
Концентрация, е.а./мл500500
Цена, руб613624544

Сайт узнавания
↑PuG(5mC)Py
Py(5mC)GPu↓
ИсточникArthrobacter oxydans 25K
Субстратная специфичностьФермент расщепляет только С5-метилированную ДНК.
Не расщепляет немодифицированную ДНК .
Субстрат для определения активностиСубстрат pMHaeIII/DriI представляет собой ДНК плазмиды pMHaeIII, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pMHaeIII содержит ген ДНК-метилтрансферазы M.HaeIII из Haemophilus aegyptuus, которая модифицирует сайт узнавания
5` GGCC 3` с образованием 5` GG(5mC)C 3`/3` C(5mC)GG 5`.
Единица активностиЗа одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза линейной формы 1 мкг плазмиды pMHaeIII/DriI за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pMHaeIII/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4).
Определение активности AoxI
В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pMHaeIII/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.

Дорожки:
1: исходная ДНК pMHaeIII/DriI
2: 0.5 мкл Aox I
3: 1 мкл Aox I
4: 2 мкл Aox I
5: 1 Kb SE ДНК-маркеры

Продукты разделены в 1%-ном агарозном геле в буфере TAE.

Оптимальный SE-буферSE-буфер AoxI (10 mM Tris-HCl (pH 7.5 при 25°C); 200 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 200 mg/ml BSA, 50% глицерин.)
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
BGOWYRose
75 - 10025 - 5010 - 2525 - 5075 - 100100
Реакционный буферSE-буфер AoxI, (10 mM Tris-HCl (pH 7.5 при 25°C); 200 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 200 mg/ml BSA, 50% глицерин.)
Оптимальная температура
60oC
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.4); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке
Неспецифический гидролизНе наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Aox I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 60°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированиюФермент расщепляет только метилированную ДНК.
Не расщепляет немодифицированную ДНК .
Инактивация 20 мин
Нет
ПримечаниеС ферментом поставляется 10 Х SE-буфер AoxI.
Литература:1. Чернухин В.А., Беличенко О.А., Тарасова Г.В., Гончар Д.А., Акишев А.Г., Дедков В.С., Михненкова Н.А., Дегтярев С.Х. Штамм бактерии Arthrobacter oxydans - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы Aox I. // Патент на изобретение RU 2399663 С1 (2009).